TPL_BEEZ2_NAV_VIEW_SEARCH

TPL_BEEZ2_NAVIGATION


Набор BioTox™

Инструкции к применению

Назначение
Набор BioToxиспользуется для определения токсичности водорастворимых образцов. Эффект ингибиции образца на светоизлучение люминесцентных бактерийVibriofischeri, измеряется люминометром. Набор BioTox- это способ быстро и просто измерить токсичность водных образцов, таких как индустриальные отходы, сточные воды, осадочные отложения и питьевая вода.

ПРИНЦИП ПРОЦЕДУРЫ (в соответствии с международным стандартом, ISO 11348-3)
Ингибиция люминесценции определяется путем смешения различных растворов в тестовом образце с люминесцентными бактериями. Уменьшение интенсивности светового излучения измеряется после времени контакта равному 5-30 минутам. Ингибирующее действие раствора сопоставляется с контрольным раствором не содержащим токсинов для определения  процента ингибиции (INH%). Значение определяется по отношению к коэффициенту разбавления и результирующая кривая используется для вычисления EC50 (коэффициент разбавления, который дал 50% подавление светового излучения) образца.

СОДЕРИМОЕ НАБОРА И ХРАНЕНИЕ

  1. 1243-550 Vibrio fischeri Реагент, 6 пробирок. Лиофилизированные VibriofischeriNRRL B-11177 вместе со стабилизаторами.
  2. 1243-551 Разбавитель реагентов, 6 пробирок, 12.5 ml.
  3. 1243-552 Разбавитель образцов, 1 бутылка, 50 ml.

Хранение реагентов
Стабильность реагентов гарантируется до окончания срока годности при условии хранения при температуре -18 °C. Набор необходимо хранить при температуре -18 °C. 1243-551 Разбавитель реагентов и 1243-552 Разбавитель образцов можно хранить при комнатной температуре.
Тест не содержит никаких лошадиных, жвачных, свиных, или птичьих образцов или материалов. Только для использования в лаборатории. Не для лечебного, домашнего или другого использования.
Обязательство: В случае возникновения проблем, пользователь должен вернуть этот лист спецификаций дистрибьютору, с детальным описанием проблемы (проблем), с которой прошлось столкнуться. Заявка будет проанализирована и исход будет сообщен просителю. Гарантия ограничивается заменой материалов.

РЕАГЕНТЫ И ИНСТРУМЕНТЫ

  1. Набор BioTox(прод.№ BO1243-500)
  2. Люмитестер PD 10 N с адаптером или Люминометр C 100
  3. − +15 °C инкубатор с сухим блоком
  4. − Кюветы для люминометра
  5. − Solid NaCl (качества для анализов)
  6. − Регулируемые пипетки 200 µl, 1 ml и 5 ml а также наконечники для пипеток
  7. − pH-метр (точность 0,1 pH единиц)
  8. 1257-130 BioTox Программное обеспечение (по желанию)
  9. − 0,1 M и/или 0,01 M NaOH
  10. − 0,1 M и/или 0,01 M HCl

ПРОЦЕДУРА ТЕСТИРОВАНИЯ

  1. Приготовьте исходный образец для тестирования уровня токсичности:

a) Если уровень pH образца не находится в промежутке между 6 и 8.5, скорректируйте pH до значения 7.0 ± 0.2 при помощи NaOH или HCl (объем образца не должен увеличиться более чем на 5 %);
b) Скорректируйте соленость образца так, чтобы она соответствовала 2% раствору NaCl. В случае с питьевой водой или образцами с низкой соленостью добавьте твердый NaCl в раствор. В случае с  питьевой водой или раствором низким уровнем солености добавьте твердый NaCl в конечную концентрацию 2% w/v или 1/10 конечного раствора добавьте 1243-552 Разбавитель образцов. Некоторые примеры уместности корректировки приведены в таблице ниже. Для растворов с высокой соленостью уменьшите количество NaCl.


Объем образца

Добавление NaCl

Добавление Разбавителя образцов

10ml

0.2g

ИЛИ

1.1ml

50 ml

1.0 g

5.5 ml

100 ml

2.0 g

11 ml

2. Восстановите реагент Vibrio fischeri, добавив содержимое 1 пузырька температуры +4 °C Разбавителя образцов. Восстановленный реагент должен быть уравновешен при +4°C в течение минимум 30 минут. Затем, стабилизируйте реагент при +15 °C в течение 30 минут до пипетирования в кюветы. Восстановленный реагент должен быть использован в тот же день и не может быть заморожен.

3. Накапайте 0.5 ml конечного бактериального раствора в кюветы, требующиеся для проведения тестов. Рекомендуется делать все растворы и контрольные образцы в двойном экземпляре. Позвольте бактериям стабилизироваться в кюветах в течение хотя бы 15 минут при температуре +15 °C.

4. Растворите достаточное количество 1243-552 Разбавителя образцов 1:10 в дистиллированной воде (например, 20 ml Разбавителя образцов и 180 мл дистиллированной воды). В случае, если для коррекции солености используется твердый NaCl вся бутылка 1243-552 Разбавителя образцов может быть растворена в 450 ml дистиллированной воды и храниться в холодильнике. Перед каждым измерением, проверьте и скорректируйте уровень pH растворенного Разбавителя образцов до 7.0 ± 0.2, при необходимости.

5. приготовьте  серийный раствор образца, в соответствии с таблицей, приведенной ниже, используя разведенный 1243-552 Разбавитель образцов в качестве разбавителя. Доведите все образцы и растворы до +15 °C хотя бы 15 минут. Все образцы и растворы должны иметь температуру +15 °C в течение всего процесса измерения.

Серия растворов, приведенная ниже, находится в соответствии со стандартом ISO 11348. Подходящий раствор выбирается в зависимости от ожидаемой токсичности образца. Уровень разбавления G = 1 используется с очень низкой токсичностью. Если разбавление образца G = 1 не используется, соответствующий контрольный реагент также исключается

Разбавление

Ровень разбавления(G)

Объем образца (µl)

добавление  2% NaCl  (µl)

Люминесцентные бактерии (µl)

Контрольные образцы
для G=1
для G>2

---
---

800
500

200
500

1:1,25
1 : 2
1 : 3
1: 4
1: 6
1: 8
1: 12
1: 16
1: 24
1: 32

1
2
3
4
6
8
12
16
24
32

800
500
333,3
250
166,7
125
83,3
62,5
41,7
31,3

-
-
167,7
250
333,3
375
416,7
437,5
458,3
468,7

200
500
500
500
500
500
500
500
500
500

ПРИМЕЧАНИЕ:
Наиболее простым способом сделать ряд разбавлений – сначала сделать два исходный раствора:

  1. − Раствор 1:1, неразведенный образец  (коэффициент разбавления в конечном образце будет 1:2).
  2. − Раствор 2:3, например, 2 ml образца + 1 ml разбавителя (коэффициент разбавления в конечном образце будет 1:3).

Все другие разбавления можно делать из исходных растворов серийным разбавлением, используя только коэффициент разбавления 1:1 (например, 1.5 ml предыдущего разбавления и 1.5 ml разбавителя). Количество серийных разбавлений определяется отдельно для каждого образца, но для большинства образцов примерно 5-10 разбавлений бывает достаточно для определения EC50. Принцип процедуры разбавления показан на картинке ниже:

6. Измерите интенсивность люминесценции (I0) в первой кювете (№1), содержащей бактериальный раствор. Немедленно добавьте 0.5 ml образца в кювету. Повторите для всех образцов, используя равные временные интервалы между всеми образцами.

7. Инкубируйте растворы образцов при +15 °C в течение выбранного времени контакта (5,15 или 30 минут). Определите интенсивность люминесценции (It) для первого образца (кювета номер 1). Повторите для всех образцов, использую тот же временной интервал, как и при первом измерении. При использовании программного обеспечения BioTox™, компьютер подскажет оператору, когда нужно измерять каждый образец. Дальнейшую информацию об использовании программного обеспечения BioTox™ вы найдете в руководстве к использованию программного обеспечения.

  1. ПРИМЕЧАНИЯ:
  2. − Температурные колебания в процессе измерения могут повлиять на результат. Удостоверьтесь, что все реагенты достигли одинаковой температуры (+15 °C).
  3. − Время контакта должно быть абсолютно одинаковым для всех образцов и контрольных образцов. Наиболее часть используемое время контакта  5, 15 и 30 минут.

ВЫЧИСЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
Программное обеспечение BioTox™ автоматически проводит все необходимые вычисления. Если программное обеспечение не используется,  процент ингибирования (INH%) вычисляется следующим образом (в данном примере время контакта 15 минут):


Где:
KF = поправочный коэффициент.
IC15 = Интенсивность люминесценции контрольного образца по прошествии времени контакта (15 мин) в относительных световых единицах.
IC0 = Изначальная интенсивность люминесценции контрольного образца в относительных световых единицах.
IT15 = Интенсивность люминесценции тестового образца по прошествии времени контакта (15 мин) в относительных световых единицах.
IT0 = Изначальная интенсивность люминесценции тестового образца в относительных световых единицах
Значение EC50 определяется использованием стандартного линейнорегрессионного анализа. Если интервал пар значений нельзя линеаризовать, значение EC50 можно определить графически, используя двойную логарифмическую систему координат. INH% отмечается на оси y, а концентрация (в мг/л, моль/л, или % исходного образца) наносится на ось х.

При использовании программного обеспечения BioTox™ для контроля за измерениями, все расчеты и графическое представление результатов производятся автоматически как показано на Схеме1.

Схема 1: Токсичность этанола, вычисленная программным обеспечением BioTox™.

ЛИТЕРАТУРА:

  1. 1. ISO 11348-3, 1999, Determination of the Inhibitory Effect of Water Samples on the Light Emission of Vibrio fischeri (Luminescent bacteria test).
  2. 2. Kahru, Anne, In vitro Toxicity testing Using Marine Luminescent Bacteria (Photobacterium Phosphoreum): the BioTox™ test; ATLA 21, 210-215, 1993
  3. 3. Kahru, Anne and Borchardt Barbara, Toxicity of MEIC Chemicals to Bioluminescent Photobacteria (the BioTox™ test): Correlation with other test systems.

В формате pdf





Россия, 109028 г. Москва
Певческий пер. 4, стр.1
Тел.: +7 495 937 45 94
Факс: +7 495 937 45 92
www.pribori.com