TPL_BEEZ2_NAV_VIEW_SEARCH

TPL_BEEZ2_NAVIGATION

CheckLite 250 Plus

ID - № 1 002 648

Набор для микробиологического исследования биомасс и гигиенического  мониторинга.
Набор на 250 исследований


CheckLite 250 Plus - набор для микробиологического исследования биомасс и гигиенического мониторинга , основанный на измерении уровня АТФ. Набор содержит термостабильную люциферазу светлячков и АТФ элиминирующий реагент. Набор CheckLite 250   – характеризуется легкостью в использовании и быстротой исследования на общую микробную загрязненность.

Принцип измерения
Биолюминисцентный реагент содержит люциферин светлячков и люциферазу. Люцифераза специфически взаимодействует с АТФ и катализирует следующую реакцию.


Количество биолюминесценции производимой в данной реакции прямо пропорционально количеству АТФ в образце.
Все живые клетки, включая, клетки микроорганизмов имеют АТФ, как собственный источник энергии. Поэтому общая клеточная масса может быть определенно измерена с помощью биолюминесценции, основанной на люциферазной реакции, после выделения (экстракции) АТФ из клеток, используя АТФ высвобождающий реагент, который имеется в наборе.

Хранение набора
Набор хранится в холодильнике при 2-8 0С. Не замораживать.

Состав набора

1. Реагент с люциферин-люциферазой «Luciferin-Luciferase reagent»:
5 пузырьков с желто-зеленой этикеткой (содержит D- Люциферин, очищенную светлячковую люциферазу, магнезии соль, TRICINE и ДДТ в лиофилизированной форме)
2. Вода – растворитель «Solvent water»:
5 пузырьков бледно-розового цвета по 5,5 мл – содержит ультра чистую воду для растворения реагента с люциферин-люциферазой.
3. АТФ выделяющий реагент «ATP releasing reagent»
11 мл х 2 пластиковых пузырька светло-голубого цвета этикеткой – содержит сурфактант, используемый для экстракции АТФ из микробных клеток.
Приготовление реагентов

1 Биолюминисцентный реагент:
(1) Реагент с люциферин-люциферазой находится под вакуумом – пузырек с зеленой этикеткой
(2) Налейте воду - растворитель из бледно-розового пузырька в открытый пузырек желто-зеленого цвета и оставьте в течение нескольких минут при комнатной температуре.
(3) Помешивайте пузырек аккуратно, чтобы не образовывались комочки. Перемешивайте до полного растворения
(4) Постарайтесь не дотрагиваться до края горлышка пузырька или верхушки резиновой пробки руками, потому, что иногда это увеличивает показатели бланк уровня реагента.
(5) В нормальном состоянии один пузырек люциферин-люциферазного реагента может быть использован более чем на 50 исследований.

Дополнительное оборудование (помимо набора)
(1) Необходим люминометр (фотоэлектронный умножитель), используемый для детекции и подсчета фотонов, такой, как Люминометр Lumitester C – 100 (Kikkoman Corporation) -  производит высокочувствительные измерения и дает хорошее соотношение сигнала/шума.
(2) Тест тубы
Полистириновые тест тубы (12 х 55 мм) необходимы для приготовления и измерения образцов.
(3) Пипетки и стерильные наконечники
Необходимы на 100, 1000 мкл.

Инструкция по использованию набора.
1. Концентрация АТФ в живых клетках изменяется очень быстро. Поэтому, необходимо сразу  выделить АТФ из клеток, либо заморозить клетки сразу после взятия образца. Даже в случае экстракции, ингибирование или разрушение АТФ – разрушающими ферментами может быть необходимо для предупреждения снижения концентрации АТФ.
2. Приготовление образца
(1) Твердые образцы:
Приготовьте образец в стомахере или гомогенизаторе и затем используйте раствор для измерения
(2) Жидкие образцы:
Когда жидкий образец мутный, окрашенный или содержит ингибирующие ионы Cl- , необходимо развести образец.

3. Измерение
(1) Поместите 100 мкл исследуемого образца и АТФ выделяющий реагент «ATP releasing reagent» в тестируемую тубу.
(2) Оставьте образец при комнатной температуре на 10-60 секунд для выделения АТФ из микробных клеток. Время, необходимое для экстракции варьирует в соответствии с видом микроорганизма. К примеру, оно составляет 10-20 секунд для выделения АТФ из бактериальных клеток и 60 секунд для выделения из дрожжевых клеток.
(3) Немедленно после экстракции, добавьте 100 мкл реагента с люциферин-люциферазой «Luciferin-Luciferase reagent» и произведите измерение уровня биолюминесценции на приборе Люминометр Lumitester C-100/(Kikkoman Corporation № 1002647). 
(4) Подсчет количества микробных клеток (КОЕ), которые были обнаружены по данной методике, основан на сравнении соотношения между количеством АТФ (RLU) и числом КОЕ (CFU), полученном ранее в соответствии с традиционной методикой подсчета.

Пример исследования см. ниже.


Внимание
Не допускать попадания реагентов набора на кожу и в глаза. В случае попадания в глаза или на кожу  немедленно смыть водой и обратиться к врачу.
Хранить в месте, специально предназначенном для реагентов, защищенном от контакта с детьми. Не допускать  контаминации реагентами и исследуемыми образцами пищи или пищевой продукции.



Информация в формате pdf