TPL_BEEZ2_NAV_VIEW_SEARCH

TPL_BEEZ2_NAVIGATION


Ридер
LabChip® EZ: всесторонний анализ ферментов


Ридер LabChip EZ от компании PerkinElmer – абсолютно необходимый прибор при работе в области поиска веществ с заданной биологической активностью, анализе ферментов и изучении свойств биомолекул. Совмещая в себе преимущества капиллярного электрофореза с технологией забора проб через иглу («сиппер») микрофлюидного  

чипа (так называемый «сиппер-чип»), данная система выполняет анализ смещения электрофоретической подвижности. Этот метод особенно хорошо зарекомендовал себя в фармакологических исследованиях, поскольку обеспечивает прямое высокоточное определение продукта и субстрата и получение кинетических данных в режиме реального времени с хорошей воспроизводимостью.

Определение смещения подвижности в биохимии

При работе с данной методикой используются субстраты, меченные флуоресцентными красителями, которые раскапываются в лунки планшетов на 96 или 384 образца. Во время измерения микрообъемы образца из каждой лунки – примерно по 10 нл – забираются и вносятся 4-мя или 12-ю сипперами  микрофлюидного чипа в микроканалы, заполненные буфером для разделения и присоединенными к разнополярным электродам. По мере продвижения реакционной смеси вдоль каналов происходит разделение субстрата и продукта. Из-за различия в соотношениях заряд:масса их подвижность меняется и они достигают точки детекции ридера LabChip EZ в разное время. В точке детекции светодиод возбуждает молекулы, меченные флуорофорами, количества разделяемых компонентов реакции замеряются и отображаются в графическом виде со значением интенсивности относительной  флуоресценции по оси Y и времени в секундах по оси Х.   

                 

Смещение подвижности: разница соотношений заряда к массе у непрореагировавшего субстрата и продукта используется для разделения на микрофлюидном чипе. На рисунке приведен пример изучения свойств протеинкиназы на ридере LabChip EZ. Субстрат – нефосфорилированный пептид - мигрирует в электрическом поле медленнее, чем фосфорилированный продукт. И субстрат, и продукт детектируются по флуоресценции, индуцированной светодиодом.

 

Прямое измерение


При измерении растворов всегда существует вероятность появления ложноположительного сигнала, вызванного аутофлуоресценцией. При анализе смещения подвижности на приборе
LabChip EZ считывание сигнала продукта и оставшегося субстрата происходит  напрямую, как и определение активности или ингибирования фермента. Исключается необходимость в использовании промежуточных реагентов или вторичных ферментов, таким образом, сокращается время анализа. Программа ридера Data Viewer автоматически идентифицирует пики и высчитывает активность фермента.


  • Высокая точность и воспроизводимость
  • Без радиоактивных меток
  • Без антител
  • Уменьшение числа артефактов






 Результаты измерений на 4-хсипперном чипе,      демонстрирующие разные варианты количественного  соотношения при превращении субстрата в продукт.      Каждая линия отображает зависимость флуоресценции  от времени, величина пика соответствует степени      завершенности реакции.


Ферментативные превращения в режиме реального времени

Технология определения смещения подвижности, реализованная в системе LabChip EZ, позволяет изучать протекание реакций  в режиме реального времени. Тем самым значительно облегчается анализ механизмов ингибирования и расчет констант диссоциации. Для характеризации активности фермента определяют его константы Михаэлиса и ингибирования, Km и Ki  соответственно. Для вычислений используют значения скорости образования продукта ферментативной реакции. Решая эту задачу альтернативными подходами, реакцию останавливают на промежуточных  этапах, в то время как  прибор LabChip EZ позволяет вести измерение в режиме реального времени, а значит, более точно.

Система LabChip EZ рекомендована при работе со следующими объектами:


·         Киназы (в т.ч. профилирование)

·         Протеазы

·         Фосфатазы

·         Липидкиназы

·         Фосфодиэстеразы

·         Белки, связывающиеся с ДНК/РНК

·         Ферменты эпигенетических модификаций (гистонацетилтрансферазы,  деацетилазы гистонов, метилтрансферазы, диметилтрансферазы)



 Данные ферментативной кинетики, полученные на системе LabChip EZ, – единственном приборе на рынке, позволяющем проводить измерения истощения субстрата и образования продукта в реальном времени.


Наборы для профилирования киназ ProfilerPro

Тестирование до 12 субстратов с 48 киназами за один день… в Вашей лаборатории!

Легко, и просто, и точно. Набор ProfilerPro состоит из подобранных киназ-субстратных пар, расположенных отдельно друг от друга на двух 384-луночных планшетах. Один планшет содержит матрицу из 24 различных киназ в замороженном виде, раскапанных по лункам планшета. В лунки субстратного планшета нанесены соответствующие пептиды, меченные флуоресцентными красителями, и АТФ. Итоговая концентрация АТФ после разведения соответствует Km АТФ. Набор включает в себя все необходимые реактивы и протоколы.



 

Информация для заказа

 

Каталожный номер

Наименование

122919

Ридер LabChip EZ

760404

ProfilerPro LabChip, 12-сипперный чип, анализ смещения подвижности с буфером CR-3, 35 мл

760394

ProfilerPro LabChip, 4-сипперный чип, анализ смещения подвижности, 3х400 мл буфера для разделения с CR-8

760373

Панель киназ ProfilerPro набор 1

760374

Панель киназ ProfilerPro набор 2

760441

Панель киназ ProfilerPro набор 3

760442

Панель киназ ProfilerPro набор 4

760462

Панель киназ ProfilerPro набор 5

760463

Панель киназ ProfilerPro набор 6

760474

Панель киназ ProfilerPro набор 7

760475

Панель киназ ProfilerPro набор 8

760637

Панель киназ ProfilerPro набор 9

760050

Реагент для покрытия 3 (CR-3), 1 x 35 мл

760278

Реагент для покрытия 8 (CR-8), 1 x 2 мл

760367

Буфер для разделения ProfilerPro, 1 х 400 мл (включает реагент для покрытия CR-8)

 

Субстраты для HDAC (1.5 mM, 0.5 mL в DMSO)


Наименование

Каталожный номер

Последовательность

Источник

Ацетилированный пептид гистона Н3

760511

FITC-TGGK(Ac)APR-COOH

Гистон H3 (a.о. 1-7)

Ацетилированный пептид белка р53

760512

FITC-TSPQPKK(Ac)-CONH2

p53 (a.о. 313-320)

Ацетилированный пептид гистона Н4

760513

FITC-LGKGGAK(Ac)-CONH2

Гистон H4 (a.о. 11-17)

 

Примечание: также доступны реагенты под другие задачи. Подробности по ссылке